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FeCo-PLLA纤维材料的溶血实验

尹志威 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1135
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视频简介溶血实验是评估材料血液相容性的重要评估手段之一,为了量化和分析材料是否具有体内应用以及与血液长期接触的能力,一般需要设置三组实验:阳性对照实验组(纯水组)、阴性对照实验组(PBS组)、以及实验组(材料组),然后测定在545nm处的吸光度(OD值),最后按照下列公式即可计算出溶血率。 溶血率(%)=(OD实验组-OD阴性对照)/(OD阳性对照-OD阴性对照)×100% ps:一般认为溶血率小于5%,可考虑具有良好的血液溶血性。
  • 视频介绍

一、视频摘要

血细胞由于外界环境的刺激导致细胞膜破裂后,胞内的血红蛋白释放到外环境而引起的现象被称为红细胞溶血。当构建的新型材料应用到生物体内时,不可避免地与大量的细胞(包括红细胞)接触,因此溶血实验是评估材料血液相容性的重要评估手段之一。为了量化和分析材料是否具有体内应用以及与血液长期接触的能力,一般需要设置三组实验:阳性对照实验组(纯水组)、阴性对照实验组(PBS组)、以及实验组(材料组),然后测定在545nm处的吸光度(OD值),最后按照下列公式即可计算出溶血率。

溶血率(%=OD实验组-OD阴性对照)/OD阳性对照-OD阴性对照)×100%

通过本次实验,测得OD实验组=0.075OD阴性对照=0.074OD阳性对照=0.844。代入上述公式得到FeCo-PLLA纤维溶血率约为0.13%。一般认为溶血率小于5%,可考虑具有良好的血液溶血性,因此FeCo-PLLA纤维具有良好的血液相容性,具有应用于体内的潜在能力。

二、关键词

纤维材料、溶血实验、血液相容性


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息


2. 试剂和耗材

新鲜小鼠血样

DPBS

超纯水

待测材料(FeCo-PLLA纤维)

血液抗凝管

15mL离心管

96孔板

金属镊子

3. 仪器和软件

分析天平,METTLER TOLEDO

离心机,Cence

37℃培养箱,Heal Force

酶标仪,BioTek


四、实验操作

1.血液抗凝管收集新鲜的小鼠血液,待用;

2.称取2mg FeCo-PLLA纤维,置于15mL离心管中,加入3mL DPBS溶液并稳定15min

3.200uL血液中加入250 uL PBS,稀释加入了抗凝剂的血液,待用;

4.准备两个干净的15mL离心管,分别加入3mL水和3mL DPBS溶液,随后分别在三个15mL离心管加入100uL的稀释血液,于37℃培养箱中孵育1h

5.室温下5000 rpm离心3min后,将各组离心后的上清液取100uL,转移到96孔板中,

6.打开酶标仪,将96孔板置于设置需要测定的孔,吸收波长设置为545nm,运行仪器并读取数值,软件导出数据后,将数值代入公式中,算出溶血率。


五、注意事项

1.抗凝血液一般最好不要超过三天,三天后,红细胞可能会发生不可逆的自溶,这将导致结果存在一定的误差。

2.材料必须在DPBS中稳定好后才能进行血液共孵育,对于疏水性材料,可适当延长稳定时间。


六、结果分析(可选)


七、参考文献(可选)

1. F. Tramer, T. Da Ros, S. Passamonti, Screening of fullerene toxicity by hemolysis assay. Methods in molecular biology, 926, 203-217 (2012).

2. Z. Yin, R. Shi, X. Xia, L. Li, Y. Yang, S. Li, J. Xu, Y. Xu, X. Cai, S. Wang, Z. Liu, T. Peng, Y. Peng, H. Wang, M. Ye, Y. Liu, Z. Chen, W. Tan, An Implantable Magnetic Vascular Scaffold for Circulating Tumor Cell Removal In Vivo. Advanced materials, e2207870 (2022).

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