一、视频摘要
实验原理:细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种储存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各类实验的必通过程。
目的:进行传代之后能为后续实验提供大量所需细胞。
结果:肝细胞每次传代成功,都为后续实验提供更多细胞,能开展更多实验。
二、关键词
肝细胞、离心、传代
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1.样品信息
BRL-3A肝细胞
2.试剂和耗材
1X
PBS缓冲液(细胞培养)
胰酶
DMEM培养基
3.仪器和软件
离心机
二氧化碳培养箱
四、实验操作
将肝细胞用胰酶消化下来后进行离心,先在T25中加入新的4mL培养基,再加入新的1mL培养基于离心管中混悬,吹打混匀,将离心管细胞液打入T25中,多次吹打,平铺T25,使细胞加入时均匀铺于T25一面。标记好细胞名、时间、代数、自己姓名后将T25放入二氧化碳培养箱。
五、注意事项
1)传代培养时要注意无菌操作,
所有操作要尽量靠近酒精灯火焰,
手不能在瓶口上方操作,以免污染气体进入瓶内。要防止细胞之间的交叉污染,
每次最好只进行一种细胞的操作,每一种细胞使用一套器材。每种试剂使用一个移液管,培养用液要严格分开。
2)坚持每天观察细胞,生长致密时即可传代。如发现有污染迹象,应丢弃污染的细胞。
3)细胞消化时要注意观察,不要消化过度,否则细胞不宜存活。吹打细胞时,确保瓶壁所有地方均吹打到,吹打时动作要轻柔,不要用力过大,以防细胞破碎。
4)培养箱不要反复多次开关,以免影响温度的稳定和增加污染的机率。
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