人脐静脉内皮细胞迁移实验

一、 视频摘要

实验原理：Transwell实验，也称为Transwell迁移或侵袭测定，是一种用于细胞生物学和分子生物学的实验室技术，用于研究细胞通过多孔膜的运动。它通常用于研究细胞对各种刺激(如生长因子、趋化因子或细胞外基质成分)的迁移、趋化性和侵袭。Transwell实验对于评估细胞通过多孔屏障迁移或侵袭的能力特别有用，多孔屏障模拟细胞必须穿过体内组织的生理条件。Transwell实验涉及Transwell小室(插入物)和孔板，它们是一种由分隔两个隔室的渗透膜组成的装置。 通常，顶部室充满细胞，而底部室包含化学引诱剂或诱导细胞迁移的物质。多孔膜允许细胞通过膜上的小孔从顶部室迁移到底部室。

实验目的：测定人脐静脉内皮细胞在驱化因子的作用下的迁移能力

实验结果：人脐静脉内皮细胞在驱化因子的作用下向小室的下室迁移

实验结论：使用驱化因子可以增强人脐静脉内皮细胞的迁移能力

二、 关键词

人脐静脉内皮细胞、迁移

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

人脐静脉内皮细胞

2.       试剂和耗材

ECM细胞培养基、FBS、PBS、0.25%胰蛋白酶消化液、4%多聚甲醛固定液、结晶紫染液。

3.       仪器和软件

HUVEC细胞、细胞计数仪、台式离心机、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管移液器、4℃、24孔培养板、Transwell小室、培养皿、棉球或棉花。

四、 实验操作

①撤血清：换无血清或低血清（5% FBS，无血清不耐受时）培养基培养细胞，清除血清的影响。
②铺下室培养基：下室铺含 10% FBS 的培养基（有些特殊实验可以加趋化因子）。
③制备细胞悬液：胰酶消化细胞，制备细胞悬液。
④铺细胞：将上层小室放入下层小室，细胞计数后将细胞铺在上层小室中。
⑤继续培养：细胞培养箱中培养 24 小时，具体时间视不同细胞而定
⑥擦去上层细胞：用棉签擦去上层小室里的细胞。
⑦固定细胞： 4%多聚甲醛室温固定10min（防止细胞形态发生改变） 。
⑧结晶紫染色：结晶紫染色液染细胞，去离子水适度漂洗，去除浮色。
⑨拍照：把染色漂洗后的上室放在一片干净的载玻片上，带膜的底面贴着载玻片，拍照时不要让细胞完全干燥，可以微微湿润，借助水的折射可以让细胞拍出来更好看。

五、注意事项

1.不同细胞的迁移和侵袭能力不同，可设置一系列细胞密度梯度摸索合适的细胞接种密度。
2.小室的放置过程经常有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失，因此需特别留心。一旦出现气泡，需将小室提起或用枪头去除，去除气泡后重新放置。

3. 接种细胞1-2小时后，可对培养板进行检查，确保没有大气泡产生。但有时会观察到有极小的汽包产生，但并不影响细胞迁移和侵袭，也可轻轻敲击孔板去除。

4. 用PBS清洗小室时，需避物理触碰小室底部。可以准备几个无菌烧杯或培养皿，倒入适量PBS，依次涮洗，可提高效率。

5. 拍照前需适当晾干小室，水分会影响镜下视野。