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人脐静脉内皮细胞迁移实验

何雨倩曾培源 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1168
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视频简介一、视频摘要
血管生成(Angiogeneseis)血管生成是在原有的血管基础上,长出新的血管,这个过程涉及内皮细胞增值形成茎细胞和有迁移能力的尖端细胞,在一定程度上延长新生血管芽的长度。内皮细胞迁移是血管生成的标志之一
二、关键词
HUVEC细胞,迁移实验,血管生成。
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 细胞信息
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)
2. 试剂和耗材
试剂:
1)ECM培养基
2)胎牛血清
3)pbs
4)含EDTA 0.25%胰蛋白酶消化液
耗材:
1)24孔板
2)灭菌移液器枪头
3)15ml离心管
4)0.8um transwell迁移小室
3. 仪器和软件
1)细胞培养箱
2)超净工作台
3)倒置显微镜
4)图像采集设备
5)血球细胞计数板
6)Image J软件
四、实验操作
1)HUVEC细胞的培养:本实验中采用含有5%的ECM培养基培养HUVEC细胞,细胞汇合度为80%进行实验
2)细胞进行消化离心后进行计数,计数后将细胞接种于transwell小室上室,迁移24小时后,多聚甲醛固定,结晶紫染色
  • 视频介绍

一、 视频摘要

实验原理:Transwell实验,也称为Transwell迁移或侵袭测定,是一种用于细胞生物学和分子生物学的实验室技术,用于研究细胞通过多孔膜的运动。它通常用于研究细胞对各种刺激(如生长因子、趋化因子或细胞外基质成分)的迁移、趋化性和侵袭。Transwell实验对于评估细胞通过多孔屏障迁移或侵袭的能力特别有用,多孔屏障模拟细胞必须穿过体内组织的生理条件。Transwell实验涉及Transwell小室(插入物)和孔板,它们是一种由分隔两个隔室的渗透膜组成的装置。 通常,顶部室充满细胞,而底部室包含化学引诱剂或诱导细胞迁移的物质。多孔膜允许细胞通过膜上的小孔从顶部室迁移到底部室。

实验目的:测定人脐静脉内皮细胞在驱化因子的作用下的迁移能力

实验结果:人脐静脉内皮细胞在驱化因子的作用下向小室的下室迁移

实验结论:使用驱化因子可以增强人脐静脉内皮细胞的迁移能力

 

二、 关键词

人脐静脉内皮细胞、迁移

 

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

人脐静脉内皮细胞

 

2.       试剂和耗材

ECM细胞培养基、FBSPBS0.25%胰蛋白酶消化液、4%多聚甲醛固定液、结晶紫染液。

 

3.       仪器和软件

HUVEC细胞、细胞计数仪、台式离心机、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管移液器、424孔培养板、Transwell小室、培养皿、棉球或棉花。

 

四、 实验操作

撤血清:换无血清或低血清(5% FBS,无血清不耐受时)培养基培养细胞,清除血清的影响。
铺下室培养基:下室铺含 10% FBS 的培养基(有些特殊实验可以加趋化因子)。
制备细胞悬液:胰酶消化细胞,制备细胞悬液。
铺细胞:将上层小室放入下层小室,细胞计数后将细胞铺在上层小室中。
继续培养:细胞培养箱中培养 24 小时,具体时间视不同细胞而定
擦去上层细胞:用棉签擦去上层小室里的细胞。
固定细胞: 4%多聚甲醛室温固定10min(防止细胞形态发生改变) 。
结晶紫染色:结晶紫染色液染细胞,去离子水适度漂洗,去除浮色。
拍照:把染色漂洗后的上室放在一片干净的载玻片上,带膜的底面贴着载玻片,拍照时不要让细胞完全干燥,可以微微湿润,借助水的折射可以让细胞拍出来更好看。

五、注意事项

1.不同细胞的迁移和侵袭能力不同,可设置一系列细胞密度梯度摸索合适的细胞接种密度。
2.
小室的放置过程经常有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失,因此需特别留心。一旦出现气泡,需将小室提起或用枪头去除,去除气泡后重新放置。

3. 接种细胞1-2小时后,可对培养板进行检查,确保没有大气泡产生。但有时会观察到有极小的汽包产生,但并不影响细胞迁移和侵袭,也可轻轻敲击孔板去除。

4. PBS清洗小室时,需避物理触碰小室底部。可以准备几个无菌烧杯或培养皿,倒入适量PBS,依次涮洗,可提高效率。

5. 拍照前需适当晾干小室,水分会影响镜下视野。

 

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