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3t3细胞复苏

朱翔宇 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1199
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视频简介细胞复苏,是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。
实验步骤
①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。
②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。
③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,36℃~38℃培养1h,让细胞贴壁。
④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,36℃~38℃培养。
⑤细胞培养24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。
⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。