首页     短视频

原代心肌细胞提取

李旭 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1234
观看次数: 2 次  复制链接
视频简介原代心肌细胞提取步骤之细胞消化:1.新生乳鼠数只,器械消毒备用 2.冰盒中放置两个平皿,皿内盛放PBS溶液用于涮洗心脏 3.乳鼠消毒后取样(酒精),从胸骨下端开始向上解剖乳鼠,先在腹部开个口,然后用镊子钝性拨开,打开胸腔,挤出心脏,用镊子取心脏放入第一个盛有PBS溶液的平皿中,速度越快越好,以保持心肌细胞的活性。4.待取完所有心脏后,在冰盒中用镊子涮洗和挤压心脏以尽量去除心脏中的血液,置于冰盒中的另一个平皿中,继续洗去血液,待洗净后用剪刀剪去心房,只留下心室部分,放入平皿中洗净(用普通胰酶洗净)
5.配制0.075%的胰酶,用PBS溶液(过滤灭菌)配制,胰酶原液0.25%,6ml原液可以稀释至20ml。
6.待洗净的心脏用剪刀剪碎置于10ml稀释的0.075%的胰酶中,使心脏组织全部浸入胰酶中(离心管中),封口后置于冰箱消化17小时。
7.消化17小时后,吸出6ml胰酶,加入4ml 0.1%的胶原酶II(塞维尔,此时浓度为0.05%,配制胶原酶需要用0.2um滤器过滤,用D-Hanks稀释配制),总共8ml细胞液,用移液枪吹打消化30min,温度维持在34-35℃左右,直至所有组织消化