细胞的吖啶橙荧光染色实验

一、视频摘要

吖啶橙（AO）是最经典的极灵敏的荧光染料，具有膜通透性，能透过细胞膜，可对细胞中的DNA和RNA同时染色，因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行染色。本实验以人乳腺癌细胞为样本，进行吖啶橙染色，观察其细胞核、细胞质颜色及细胞形态。

二、关键词

吖啶橙染色，细胞形态学观察，核酸染色

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

人乳腺癌细胞系

2. 试剂和耗材

试剂：

1.  吖啶橙染液

2.  1%醋酸

3.  95%酒精

4.0.1M CaCl₂

4.  PBS

5.  甘油

6.  胰酶

耗材：

1.6孔培养板

2.  注射器

3.  巴氏管

4.  盖玻片

5.  载玻片

6.  离心管

7.  移液枪头

8.  手套

3. 仪器和软件

1.酒精灯

2.移液枪

3.眼科弯镊

4.荧光倒置显微镜

四、实验操作

1.样品制备：对于贴壁生长的细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约为1×10⁵个/ml。取一块6孔板每孔分别加入高压灭菌的盖玻片后，加入2ml细胞悬液进行培养。

2.吸出培养液，用PBS洗涤三次，每次一分钟。

3.用95%酒精固定20分钟，稍微控干酒精。

4.滴加1%醋酸作用30秒。

5.直接滴加1×10^-4吖啶橙染色30-60秒。

6.滴加0.1M CaCl₂处理两分钟。

7.PBS漂洗三次，每次一分钟。

8.控干水，在载玻片上滴加1-2滴甘油临时封片，将有细胞一面的盖玻片朝下盖于载玻片上。

9.将玻片置于荧光显微镜下观察。

五、注意事项

1.样品制备时注意无菌操作。

2.  用95%酒精固定细胞期间，防止酒精完全挥发导致细胞面干掉，可在固定期间适时滴加酒精。

3.  滴加醋酸、染液等试剂时，注意覆盖完全细胞面。