一、视频摘要
吖啶橙(AO)是最经典的极灵敏的荧光染料,具有膜通透性,能透过细胞膜,可对细胞中的DNA和RNA同时染色,因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行染色。本实验以人乳腺癌细胞为样本,进行吖啶橙染色,观察其细胞核、细胞质颜色及细胞形态。
二、关键词
吖啶橙染色,细胞形态学观察,核酸染色
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
人乳腺癌细胞系
2. 试剂和耗材
试剂:
1. 吖啶橙染液
2. 1%醋酸
3. 95%酒精
4.0.1M CaCl2
4. PBS
5. 甘油
6. 胰酶
耗材:
1.6孔培养板
2. 注射器
3. 巴氏管
4. 盖玻片
5. 载玻片
6. 离心管
7. 移液枪头
8. 手套
3. 仪器和软件
1.酒精灯
2.移液枪
3.眼科弯镊
4.荧光倒置显微镜
四、实验操作
1.样品制备:对于贴壁生长的细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约为1×105个/ml。取一块6孔板每孔分别加入高压灭菌的盖玻片后,加入2ml细胞悬液进行培养。
2.吸出培养液,用PBS洗涤三次,每次一分钟。
3.用95%酒精固定20分钟,稍微控干酒精。
4.滴加1%醋酸作用30秒。
5.直接滴加1×10-4吖啶橙染色30-60秒。
6.滴加0.1M CaCl2处理两分钟。
7.PBS漂洗三次,每次一分钟。
8.控干水,在载玻片上滴加1-2滴甘油临时封片,将有细胞一面的盖玻片朝下盖于载玻片上。
9.将玻片置于荧光显微镜下观察。
五、注意事项
1.样品制备时注意无菌操作。
2. 用95%酒精固定细胞期间,防止酒精完全挥发导致细胞面干掉,可在固定期间适时滴加酒精。
3. 滴加醋酸、染液等试剂时,注意覆盖完全细胞面。
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