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细胞的吖啶橙荧光染色实验

黄馨 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1314
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视频简介吖啶橙(AO)是最经典的极灵敏的荧光染料,具有膜通透性,能透过细胞膜,可对细胞中的DNA和RNA同时染色,因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行染色。本实验以人乳腺癌细胞为样本,进行吖啶橙染色,观察其细胞核、细胞质颜色及细胞形态。
  • 视频介绍

一、视频摘要

吖啶橙AO是最经典的极灵敏的荧光染料具有膜通透性能透过细胞膜可对细胞中的DNARNA同时染色因此AO常用于细胞内DNARNA进行染色。本实验以人乳腺癌细胞为样本进行吖啶橙染色观察其细胞核、细胞质颜色及细胞形态。

 

二、关键词

吖啶橙染色,细胞形态学观察,核酸染色

 

、实验样品信息试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

人乳腺癌细胞系

 

2. 试剂和耗材

试剂:

1.  吖啶橙染液

2.  1%醋酸

3.  95%酒精

4.0.1M CaCl2

4.  PBS

5.  甘油

6.  胰酶

 

耗材:

1.6孔培养板

2.  注射器

3.  巴氏管

4.  盖玻片

5.  载玻片

6.  离心管

7.  移液枪头

8.  手套

 

 

3. 仪器和软件

1.酒精灯

2.移液枪

3.眼科弯镊

4.荧光倒置显微镜

 

 

四、实验操作

1.样品制备:对于贴壁生长的细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约为1×105/ml。取一块6孔板每孔分别加入高压灭菌的盖玻片后,加入2ml细胞悬液进行培养。

2.吸出培养液,用PBS洗涤三次,每次一分钟。

3.95%酒精固定20分钟,稍微控干酒精。

4.滴加1%醋酸作用30秒。

5.直接滴加1×10-4吖啶橙染色30-60秒。

6.滴加0.1M CaCl2处理两分钟。

7.PBS漂洗三次,每次一分钟。

8.控干水,在载玻片上滴加1-2滴甘油临时封片,将有细胞一面的盖玻片朝下盖于载玻片上。

9.将玻片置于荧光显微镜下观察。

 

 

五、注意事项

1.样品制备时注意无菌操作。

2.  95%酒精固定细胞期间,防止酒精完全挥发导致细胞面干掉,可在固定期间适时滴加酒精。

3.  滴加醋酸、染液等试剂时,注意覆盖完全细胞面。

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