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Snapgene 模拟分子克隆构建过表达载体

宋绍萱 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1327
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视频简介我们的作品向大家介绍如何使用Snapgene(质粒图谱查看软件)去模拟我们已经设计好的引物,进行PCR扩增和与载体的连接。可以更加直观地判断我们的引物设计是否正确,质粒所包含的元件是否完整,以及为序列比对提供理论模板。
  • 视频介绍

一、视频摘要

我们的作品向大家介绍如何使用Snapgene(质粒图谱查看软件)去模拟我们已经设计好的引物,进行PCR扩增和与载体的连接。可以更加直观地判断我们的引物设计是否正确,质粒所包含的元件是否完整,以及为序列比对提供理论模板。

 

二、关键词

SnapgenePCR扩增、质粒构建、分子克隆

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

#366 pLJM1-ECORI-hDDX3X-ECORI-Flag质粒载体

DDX3X基因序列

 

2. 试剂和耗材

 

3. 仪器和软件

电脑、Snapgene软件、WordTm引物设计网站

 

 

四、实验操作

1、打开Snapgene软件,选择Action中的PCR选项

2、将我们之前设计好的引物输入到相应的框中

3、进行一轮巢式PCR扩增

4、扩增完成后对产物进行命名保存

5、在一轮产物的基础上进行二轮pcr扩增

6、输入二轮PCR带同源臂的引物,进行二轮PCR扩增

7、将扩增好的二轮产物进行命名保存

8、打开我们所需要的载体

9、点击in-fusion克隆

10、选择ECoRI酶切位点

11、插入二轮PCR产物

12、点击clone,对质粒进行命名保存

 

五、注意事项

1、设计引物的时候不可把引物的正反向搞混

2、引物的Tm值最好相差不要太大

 

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