一、视频摘要
我们的作品向大家介绍如何使用Snapgene（质粒图谱查看软件）去模拟我们已经设计好的引物，进行PCR扩增和与载体的连接。可以更加直观地判断我们的引物设计是否正确，质粒所包含的元件是否完整，以及为序列比对提供理论模板。
二、关键词
Snapgene、PCR扩增、质粒构建、分子克隆
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
#366 pLJM1-ECORI-hDDX3X-ECORI-Flag质粒载体
DDX3X基因序列
2. 试剂和耗材
无
3. 仪器和软件
电脑、Snapgene软件、Word、Tm引物设计网站
四、实验操作
1、打开Snapgene软件，选择Action中的PCR选项
2、将我们之前设计好的引物输入到相应的框中
3、进行一轮巢式PCR扩增
4、扩增完成后对产物进行命名保存
5、在一轮产物的基础上进行二轮pcr扩增
6、输入二轮PCR带同源臂的引物，进行二轮PCR扩增
7、将扩增好的二轮产物进行命名保存
8、打开我们所需要的载体
9、点击in-fusion克隆
10、选择ECoRI酶切位点
11、插入二轮PCR产物
12、点击clone，对质粒进行命名保存
五、注意事项
1、设计引物的时候不可把引物的正反向搞混
2、引物的Tm值最好相差不要太大
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