一、视频摘要
本实验采用流式细胞术，对CD4+T细胞的活化比例进行检测。旨在根据细胞荧光强度的不同，对细胞是否活化进行区分。该方法大大提升了群体反应性检测的灵敏度和反应性。是目前检测CD4+T细胞活化比例的常用方法。学习该方法对我们的日常实验具有重要意义
二、关键词
流式细胞术；CD4+T细胞；细胞荧光；细胞活化
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1. 试剂和耗材
试剂：
①PBS溶液
②抗体：
anti-human CD69
anti-human CD25
anti-human CD4
③75%酒精
④锡箔纸
⑤培养液
耗材：
①15ml离心管
②锡箔纸
③封口膜
④流式滤纸
2. 仪器和软件
①流式细胞仪
②离心机
四、实验操作
1. 取洁净离心管并标号，将从人外周血中提取的CD4+T细胞从细胞培养板中吸出，并用PBS将细胞培养板冲洗两遍，放入离心机中以500g离心力离心5min
2. 离心后弃掉上清液，然后在离心管内加入100ulPBS重悬细胞。（此步骤后要关闭生物安全柜的灯光）
3. 取出我们所需的抗体，向对应离心管内加入3ul抗体，并在加样后用锡箔纸将离心管包裹起来
4. 将离心管置于4℃冰箱中，避光孵育30min
5. 孵育结束后，向各管内加入3mlPBS缓冲液，以500g5min离心
6. 离心后弃掉各管内上清液，此时管内约存留200ul液体，再向各管内加入250ulPBS重悬细胞
7. （流式操作）剪取适当大小的滤纸，并将流式管进行分组编号，吸取离心管内的细胞悬液，用滤纸过滤后收集到对应流式管内，准备上机
8. 上机检测，得出对应流式结果图。对所得结果图进行数据分析后，进行下游实验
五、注意事项
1.在抗体孵育阶段需牢记利用锡箔纸进行避光，以免抗体内的荧光淬灭
2.在孵育后加入3mlPBS缓冲液旨在保持一个最佳的离心液面高度
3.吸取细胞时要多次反复冲洗，以免在培养板内残留过多细胞
4.全程注意无菌操作，保持无菌观念
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