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流式细胞术——检测CD4+T细胞的活化比例

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视频简介本实验采用流式细胞术,对CD4+T细胞的活化比例进行检测。旨在根据细胞荧光强度的不同,对细胞是否活化进行区分。该方法大大提升了群体反应性检测的灵敏度和反应性。是目前检测CD4+T细胞活化比例的常用方法。学习该方法对我们的日常实验具有重要意义。
  • 视频介绍

一、视频摘要

 

本实验采用流式细胞术,对CD4+T细胞的活化比例进行检测。旨在根据细胞荧光强度的不同,对细胞是否活化进行区分。该方法大大提升了群体反应性检测的灵敏度和反应性。是目前检测CD4+T细胞活化比例的常用方法。学习该方法对我们的日常实验具有重要意义

 

二、关键词

 

流式细胞术;CD4+T细胞;细胞荧光;细胞活化

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 试剂和耗材

试剂:

PBS溶液

②抗体:

anti-human CD69

anti-human CD25

anti-human CD4

75%酒精

④锡箔纸

⑤培养液

耗材:

15ml离心管

②锡箔纸

③封口膜

④流式滤纸

2. 仪器和软件

①流式细胞仪

②离心机

 

四、实验操作

 

1.    取洁净离心管并标号,将从人外周血中提取的CD4+T细胞从细胞培养板中吸出,并用PBS将细胞培养板冲洗两遍,放入离心机中以500g离心力离心5min

2.    离心后弃掉上清液,然后在离心管内加入100ulPBS重悬细胞。(此步骤后要关闭生物安全柜的灯光)

3.    取出我们所需的抗体,向对应离心管内加入3ul抗体,并在加样后用锡箔纸将离心管包裹起来

4.    将离心管置于4℃冰箱中,避光孵育30min

5.    孵育结束后,向各管内加入3mlPBS缓冲液,以500g5min离心

6.    离心后弃掉各管内上清液,此时管内约存留200ul液体,再向各管内加入250ulPBS重悬细胞

7.    (流式操作)剪取适当大小的滤纸,并将流式管进行分组编号,吸取离心管内的细胞悬液,用滤纸过滤后收集到对应流式管内,准备上机

8.    上机检测,得出对应流式结果图。对所得结果图进行数据分析后,进行下游实验

 

五、注意事项

 

1.在抗体孵育阶段需牢记利用锡箔纸进行避光,以免抗体内的荧光淬灭

2.在孵育后加入3mlPBS缓冲液旨在保持一个最佳的离心液面高度

3.吸取细胞时要多次反复冲洗,以免在培养板内残留过多细胞

4.全程注意无菌操作,保持无菌观念

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