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质粒瞬时转染(脂质体法)

刘奕伶 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1420
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视频简介一、视频摘要
脂质体与质粒结合形成复合物,吸附到细胞膜表面,通过细胞内吞等作用,质粒进入到细胞内,利用细胞中的蛋白表达系统,在质粒转染后的一段时间内表达外源蛋白,从而发挥过表达或干扰基因的目的。
二、关键词
转染
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息

2. 试剂和耗材
试剂:10% RPMI 1640、PBS、胰酶、待转染的质粒、jetPRIME试剂盒
耗材:六孔板、EP管、不同规格的枪头、不同规格的移液枪、细胞计数板、冰盒、计时器

3. 仪器和软件
光学显微镜、生物安全柜、 CO2培养箱、离心机

四、实验操作
1、选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行铺板,当细胞密度达到60%-80%时进行转染
2、将2 µg DNA加入至200 µL jetPRIME缓冲液,轻吹混匀
3、加入4 µL jetPRIME,轻吹混匀
4、在室温孵育10-15分钟
5、将转染混合物滴加至六孔板中,摇动培养板,轻轻混匀
6、将六孔板置于 37℃、5% CO2培养箱中培养
7、转染后的4-10小时之内,将转染培养基更换为细胞生长培养基, 37℃、5% CO2培养箱中继续
  • 视频介绍

一、视频摘要

脂质体与质粒结合形成复合物,吸附到细胞膜表面,通过细胞内吞作用,质粒进入到细胞内,利用细胞中的蛋白表达系统,在质粒转染后的一段时间内表达外源蛋白,从而发挥过表达或干扰基因的目的。

 

 

二、关键词

转染、瞬转、过表达、干扰

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

待转染的细胞

 

2. 试剂和耗材

试剂:RPMI 1640培养基、0.25%胰蛋白酶-EDTA、胎牛血清、PBS、胰酶、待转染的质粒、jetPRIME试剂盒(Polyplus 货号:101000046

耗材:六孔板、EP管、不同规格的枪头、不同规格的移液枪、细胞计数板、冰盒、计时器

 

3. 仪器和软件

光学显微镜、生物安全柜、 CO2培养箱、离心机

 

 

四、实验操作

以下操作以六孔板为例:

1.选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行铺板,当细胞密度达到60%-80%时进行转染

2.2µg DNA加入至200µL jetPRIME缓冲液,轻吹混匀

3.再加入4µL jetPRIME,轻吹混匀

4.室温孵育10-15分钟

5.将转染混合物滴加至六孔板中,摇动培养板,轻轻混匀

6.将六孔板置于37℃、5% CO2培养箱中培养

7.转染8小时后,将转染培养基更换为完全培养基,37℃、5% CO2培养箱中继续培养

 

五、注意事项

1、选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。

2、细胞密度宜达到60%-80%时进行转染。

3、血清会影响脂质体与质粒结合,最好在jetPRIME缓冲液中孵育。

4、本次实验使用jetPRIME试剂盒(Polyplus 货号:101000046)进行转染,使用其他试剂转染应详细阅读说明书。

 

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