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使用Celetrix电转仪进行HEK293细胞的电转导入质粒

凌鑫宇 |  2020-12-29  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v663
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视频简介 细胞转染通常可以分为化学转染和电转,将外源生物大分子如质粒,mRNA,蛋白质导入细胞可以进而进行功能研究和细胞系的构建。对于长度较长的质粒或者向一个细胞中导入多个质粒,化学转染方式通常会受限于转染试剂而无法实现高效的转染,电转在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜,由于依靠的是物理方法,细胞表面的分子特性对电转影响比较小。相比化学转染方法和病毒载体转染方法,电转可以用在所有的细胞种类上,而且容易定量控制。
在本实验中,拟使用Celetrix LLC的电转仪,对于HEK293T细胞通过导入含有基因编辑CRISPR/Cas9的质粒来实现稳定敲除细胞系的构建。实验中首先配置电转buffer,将A液和B液按照1:1的比例进行混合,进而将HEK-293T细胞消化,计数获得106个细胞,将其重悬于20ul电转buffer中,加入3ug质粒进行电转,电转条件为420V 30ms,在电转结束后将细胞置于预热的2ml培养基进行继续培养。
实验中所使用的仪器为CTX-1500A LE型号电转仪,电极杯为20 μl; 12-0107型号,电转b