实验原理和目的:原生质体是除去细胞壁的裸露细胞。由于消除了细胞壁的障碍,故原生质体是遗传操作、基因转化的好材料。以植物原生质体为材料进行遗传转化,可以瞬间表达外源基因,也可以获得外源基因稳定表达的转基因细胞系或转基因植株,此方法将外源基因转入之后从单个细胞发育,中途没有外源。常用的进行原生质体遗传转化的方法有电击法和PEG介导的转化法。电击法利用高压电脉冲使细胞膜发生瞬间的可逆穿孔,从而使外源基因穿过细胞膜而进入细胞中。这种方法操作简单,转化效率高,但是需要电击仪。PEG (聚乙二醇) 介导的转化方法是通过PEG处理改变细胞膜的通透性,从而使外源DNA易于进入原生质体。此方法不需要特殊的仪器设备,实验结果比较稳 定。本实验主要是从PEG介导的方法展开。原生质体可以从悬浮培养的细胞分离,也可以由新鲜叶片分离制备,然后进行遗传转化。
关键词: 原生质体, PEG, 遗传转化
材料与试剂
注:本实验中叶片及愈伤的准备,原生质体的分离、纯化、活体检查操作步骤所需试剂见柑橘原生质体融合-电融合 (刘丹等,2018)。
仪器设备
注:本实验中叶片及愈伤的准备,原生质体的分离、纯化、活体检查操作步骤所需设备见柑橘原生质体融合-电融合 (刘丹等,2018)。
实验步骤
溶液配方
参考文献
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