小鼠体细胞核移植
Mouse Somatic Cell Nuclear Transfer
Authors: 丁一夫陈国元,
唐蔚,
吴宝金 and
date: 09/20/2022,
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三、 供体细胞的准备核移植所用的供体细胞有很多,应当根据不同的细胞选择不同细胞准备方式,下面以卵丘细胞为例。 (完整的去核以及核移植视频见视频A) 视频A.卵母细胞去核及体细胞核移植 在最后一组去核卵母细胞注射完并移到CZB液滴30分钟后,将所有的重构卵母细胞移至激活液液滴中,注意CZB中的钙会显著影响激活液对重构卵母细胞的激活 五、 卵母细胞体细胞核移植使用微量上样器从注射针的尾部向针内加入约2-3 mm高的汞(有的系统中,使用无毒性的重油替代有毒的
猪体细胞核移植
Porcine Somatic Nuclear Transfer
Authors: 樊娜娜欧阳振,
王教伟,
赵宇,
赖良学 and
date: 11/20/2022,
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供体细胞的处理
处于G0期(静止期)和G2/M期的体细胞均可作为核移植供体细胞。G0期细胞的获得(血清饥饿法):
解冻细胞,铺于24孔板或4孔板中培养。 在猪的核移植中,胎儿成纤维细胞由于其分布广泛,易于获得,特别是在体外具有良好的增殖能力,适合进行基因修饰用于基因修饰猪的制作,是目前最为常用的供体细胞类型。 消化,离心收集细胞,用胚胎操作液重悬细胞,用作供体细胞。成熟卵母细胞的去核
核移植前需要对成熟卵母细胞进行去核处理,以清除卵母细胞核遗传物质对克
猴体细胞核移植
Somatic Cell Nuclear Transfer of Monkeys
Authors: 王燕许玉婷,
李春杨,
孙强 and
date: 03/20/2023,
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四、体细胞核移植在实验前使用P97拉针仪将毛细管玻璃(B100-75-10)拉制合适的长度和并使用MF-900锻针仪准备去核显微操作针注射针和RNA注射针和持卵针,去核针外径8-10 μm,内径 7-9 三、成纤维供体细胞准备从液氮中取1管成纤维细胞,在37 °C水浴中快速解冻。立即将细胞转移到15 ml 的离心管中。加入3-5 ml 细胞培养基,轻轻吹打混匀。 在一个操作液滴加适量2.5 mol/L融合病毒包膜(HVJ-E),将供体细胞滴加到这个操作滴中。将去核的卵母细胞移入其他操作滴中,用激光破膜仪在透明带打出一个通道
猪胚胎移植
Embryo Transfer
Authors: 樊娜娜赵宇,
欧阳振,
李昊,
赖良学 and
date: 12/20/2022,
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... 结果与分析胚胎移植后24-26天进行B超监测妊娠情况,受精卵移植后妊娠率80%左右,核移植胚胎供体细胞不同,妊娠率不同在30-80%之间。 失败经验受体的同情发情时胚胎移植成功的关键,与正常受精胚胎相比核移植胚胎发育滞后,妊娠率也不同,一般在30%~80%之间。可选择核移植第二天发情受体进行胚胎移植。 如果移植的是核移植胚胎,考虑到植入胚胎质量不高,需要增加移植胚胎的数量以保证有足够的胚胎启动和维持妊娠。 目前,较为普遍的做法是核移植后培养18-22小时,选择形态良好的胚胎通过手