• Peer-reviewed
  • Preprint
  • Extracted from published research articles
  • 生物化学
  • 生物信息学与计算生物学
  • 生物物理学
  • 癌症生物学
  • 细胞生物学
  • 发育生物学
  • 免疫学
  • 微生物学
  • 分子生物学
  • 神经科学
  • 植物科学
  • 干细胞
  • 系统生物学
  • 相关性
  • 日期
  • 浏览量
荧光素酶酶活恢复法检测体内蛋白质互作
In vivo Detection of Protein Interactions Using Luciferase Assay
Authors:  王磊鄢文豪, 欧阳亦聃 and date: 04/09/2018, view: 15249, Q&A: 3
同时可以转化一对确定互作的蛋白质来评价系统的有效性。必须共转化一个恒定表达的报告基因 (如35S:REN) 来平衡化各个转化之间的系统误差和转化效率的差别。 可以将相关元件连接改造到可以进行农杆菌介导的转化的载体上去，从而可以在体内稳定检测蛋白质之间的相互作用。 计算LUC和REN的比值，统计分析实验组和对照组之间是否存在显著差异，从而判断所检测蛋白质之间是否存在相互作用。注意事项本实验必须要设计严谨的对照。
利用SPR技术高通量筛选蛋白互作活性小分子
High-Throughput Screening for Small Molecules Interacting with Targeted Protein by SPR Technology
Authors:  刘伟谢华彬, 王烁英, 慈云青, 许超, 兰姝珏, 陈铭 and date: 03/06/2025, view: 1830, Q&A: 0
相比其它分子互作筛选体系而言，基于SPR技术的高通量筛选体系主要缺点是其筛选成本相对较高。但其高灵敏度性能以及宽广的可适用范围是其它分子互作筛选体系目前未能超越的。 以筛选靶标蛋白互作小分子化合物为例，图1展示了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心化学生物学技术平台创建的利用Biacore 8K仪器发现与靶标蛋白互作小分子化合物的高通量筛选完整流程。 作为分子互作的金标准，表面等离子共振目前已先后被美国药典、日本药典及
利用RNA免疫共沉淀以及RT-qPCR实验验证MDA-MB-231-LM2细胞中LDHA蛋白与非编码RNA LINC00973的相互作用
Detecting the Interaction between non-coding RNA LINC00973 and LDHA Protein in MDA-MB-231-LM2 Cells by RNA Immunoprecipitation and RT-qPCR
Authors:  朱林王会丽, 王栋 and date: 09/27/2022, view: 1630, Q&A: 0
... 相比于其他基于蛋白去鉴定互作RNA的技术，如CLIP-seq等，RIP实验具有实验流程短、操作简便易上手、花费少等优点，是我们研究蛋白质与RNA互作常用的技术。 研究背景随着对蛋白质功能研究的深入，越来越多的蛋白质被发现具有RNA结合能力。RIP实验可帮助我们快速确定靶蛋白能否结合我们感兴趣的目的RNA。 注意事项所有的实验用品都要保证没有RNase和蛋白酶，以免RNA和蛋白质的降解干扰实验结果。 RIP缓冲液和细胞裂解缓冲液的配置，要额外添加
应用Biacore技术检测Hnt3蛋白与双链DNA的亲和力
Application of Biacore Technology to Detect the Affinity of Hnt3 Protein to Double-stranded DNA
Authors:  刘雪静高靓, 朱德裕, 曹鹏, 龚勇, 陈媛媛 and date: 10/18/2023, view: 1244, Q&A: 0
... 摸索实验浓度梯度：选择构建的突变体是在结构中Hnt3与DNA有互作的氨基酸，推测会造成亲和力的下降。 在蛋白-DNA的SPR互作分析中曾多次出现快结合快解离的模式。此类实验不需要摸索再生条件，相对简单。 由于Hnt3与DNA的互作属于快结合快解离，因此选择“Steady State Affinity”模型。 H138、S142突变成Ala，亲和力为11.05和16.94 μM，变化不大，说明这两个氨基酸不是Hnt3与DNA互作的关键氨基酸。
新型冠状病毒广谱中和抗体药物的筛选
Screening of Broad-spectrum Neutralizing Antibody Drugs for Novel Coronavirus
Authors:  侯敬丽唐浩能 and date: 04/08/2024, view: 1059, Q&A: 0
... 另外如果需要获得亲和力常数的偏差值，可以重复2次及以上抗原抗体互作的测试。 在本实验案例中，SARS-CoV-2 S trimer与中和抗体的解离过程比较缓慢，为了更准确测试解离常数，需要延迟互作的解离时间。 再生条件摸索： 用CM5芯片做抗原抗体互作测试时，需要选择合适的再生条件，既能满足将分析物洗脱干净的要求，又要保证配体蛋白的活性基本不受影响。 实验注意要点配体偶联： 对于抗原和抗体相互作用实验，在保证检测灵敏度的情况下抗原的偶联量尽量降低，减少互作
凝胶阻滞(EMSA)
EMSA Protocol
Authors:  王鹏杨莹, 余四斌 and date: 03/15/2018, view: 20701, Q&A: 2
与DNA互作的粗体蛋白和纯化蛋白的浓度在随着实验进行，需要被优化。因为过多或者过少的蛋白浓度都会对信号结果的读取产生影响。 DNA和蛋白的互作稳定性受到孵育缓冲液里的盐浓度和pH的影响。因此可以尝试不同的缓冲液 (Hellman and Fried, 2007)。 甘油α 32P dCTP MgCl2 NaClEDTADTT甘氨酸 (Glycine)BSA分离胶 (见溶液配方)10x binding Buffer (见溶液配方)电泳缓冲液
利用Biacore8K+高通量筛选靶向生物大分子的小分子活性物质
High-Throughput Screening of Small-molecular Targeting Biomolecular by Biacore8K+
Authors:  常卿杨姊, 李文奇 and date: 08/20/2021, view: 5325, Q&A: 0
... 通过Biacore8K+高通量互作分析系统的小分子高通量筛选程序LMW screen快速检测了抗COVID-19中药单体库的160个天然小分子。 二、利用Biacore8K+高通量互作分析系统进行高通量筛选方法设置1.1在控制软件界面点击Methods，选择数据库中的方法LMW screen 1,进入Method Builder界面，在Method 致谢感谢清华大学结构生物学高精尖创新中心的经费支持和蛋白质研究技术中心蛋白质制备与鉴定平台提供仪器支撑服务。感谢北京协和医院张抒扬课