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高通量siRNA文库筛选体系的建立及优化
High-Throughput siRNA Library Screening Assay Development and Optimization
Author:  韩帅date: 10/22/2021, view: 3913, Q&A: 0
高通量siRNA文库筛选流程从具体操作步骤来讲，笔者单位开展正式高通量siRNA文库筛选的常规流程如图2。共有四个大的步骤：siRNA文库制备及分装。 使用自动化液体工作站将siRNA文库从存储板分装至开展筛选所需的细胞培养板中，制备成可直接用于文库筛选的siRNA文库 (文库制 备的详细步骤及自动化液体工作站
siRNA文库筛选细胞活力调控因子---CellTiter-Glo法
siRNA Library Screening of Regulatory Factors of Cell Viability—CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay
Authors:  陈敏骆大葵, 韩帅, 李心翔, 高大明 and date: 06/01/2021, view: 3222, Q&A: 0
由于候选基因数量不多（<100个），且除了最后收集CTG数据外还希望获取整个实验过程中的细胞生长曲线，因此本实验选用96孔板进行siRNA文库筛选实验。 2.1由自动化液体工作站制备好siRNA文库板，每个孔10 μl siRNA（200nM）。 筛选体系建立及优化 为建立最优的筛选实验体系，我们测试并优化了多种实验条件，主要包括：细胞接种密度、CTG检测阈值、CTG用量、siRNA转染试剂及用量。 siRNA
全基因组siRNA高通量筛选调控Wnt/β-catenin信号转导的关键基因
High-throughput Genome-wide siRNA Screen for Key Genes Regulating Wnt/β-CateninSignaling
Authors:  毛丽宋晓敏, 李林 and date: 12/07/2021, view: 3101, Q&A: 0
3)基因家族siRNA文库筛选 完成了基因家族siRNA组合文库的构建后，我们针对基因家族siRNA组合文库进行了高通量功能缺失筛选。 基因家族siRNA文库筛选结果 完成了基因家族siRNA组合文库的构建后，我们针对基因家族siRNA组合文库进行了高通量功能缺失筛选。 siRNA文库
细胞周期调控因子筛选---FUCCI活细胞标记法
Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells Labeling Method
Authors:  鲁家骏韩帅, 杨巍维 and date: 09/05/2021, view: 4314, Q&A: 1
感谢中科院生化与细胞所化学生物学技术平台在高通量siRNA文库筛选及高内涵成像分析实验中给予的帮助，感谢细胞分析技术平台在流式细胞实验中给予的帮助。 二、 siRNA文库转染 经转染优化实验，确定最适转染条件为：在384孔板中，使用DharmaFECT1 0.05 μl/孔，细胞接种密度 650个/孔，转染72 h后进行表型检测 (见注意事项9)。 通常情况下，由于实验安排的限制，一般分好siRNA的384孔板都放于-80 °C冰箱保存，待正式筛选实验开始时，提前拿出恢
全基因组siRNA法筛选环形RNA的反式调控因子
Genome-wide siRNA Screen for trans-factors of Circular RNA Regulation
Authors:  李响陈玲玲 and date: 06/01/2021, view: 2824, Q&A: 0
后续进一步挑选带有合适绿色、红色荧光的细胞系，即为筛选用的可诱导circmCherry-EGFP 报告细胞系。二、全基因组siRNA文库筛选 (图2)图2. 筛选结果中代表性的384孔板成像图片结果与分析筛选的384板经Operetta成像的结果中，第2列为Scramble组 (阴性对照组)；第3列至第22列为siRNA处理组。 筛选结果的初步数据分析步骤及结果 利用Scramble组的GFP和RFP荧光值分别标准化各siRNA处理组
全基因组siRNA法筛选长非编码RNA NEAT1的转录调控因子
Genome-wide siRNA Screen for Transcription Regulators of Long Noncoding RNA NEAT1
Authors:  王洋陈玲玲 and date: 07/07/2021, view: 2135, Q&A: 0
二、全基因组siRNA文库筛选 (图2)图 2. Human siGENOME SMARTpool siRNA library筛选NEAT1G-HeLa-R 流程。 对于基因转录调控的筛选目前普遍使用全基因组RNAi文库或CRISPR/Cas9文库。 所以这里我们采用RNAi文库筛选的方式对NEAT1进行转录调控的筛选。 相比之下CRISPR/Cas9筛选过程中细胞单一性较强，
基于反应元件的调控因子筛选——双荧光报告基因法
Dual Fluorescence Reporter-based siRNA Screening of Transcription Regulators of Response Elements
Authors:  郝子健李正威, 杨凡, 胡荣贵 and date: 07/26/2021, view: 4052, Q&A: 0
二、siRNA文库初筛正式筛选实验开始前，请进行预实验，摸索最适的筛选条件（包括阴性对照siRNA的种类、转染试剂的种类和体积、细胞接种的密度等），见表1。表 1 . 优化后的筛选条件第一天将siRNA文库（384孔板）从-20 °C冰箱取出于室温解冻，分散放在桌面的吸水纸上。 将文库移入超净台A中，擦净盖子内外侧的冷凝水。 本次筛选文库含有6块384孔板。96孔板的每个孔对应384孔板的2孔*6块
siRNA文库存储板的制备方法
Preparation of whole genome siRNA library
Authors:  杨荣超韩 帅, 陈 铭 and date: 08/20/2021, view: 2393, Q&A: 0
从多个siRNA筛选项目的结果来看，两种文库制备流程均可得到质量合格的siRNA筛选文库 (Mao et al., 2016；Li et al., 2017；Lu et al., 2019；Wang et 已有多个实验室使用由此方法制备的siRNA文库开展筛选并发表文章 (Mao et al., 2016；Li et al., 2017；Lu et al., 2019；Wang et al., 2019； 在开展筛选