摘要:通过观察超薄切片,观察细胞内结构及变化情况。本实验主要是用于观察筛管伴胞复合体及胞间连丝情况。
关键词: 细胞, 超微结构, 果实
材料与试剂
注: 除特别说明,所用试剂均为购自sigma-Aldrich公司。
- 刀片 (普通双面刀片,用于切取果肉组织)
- 包埋盒
- Formvar
- 苹果
- 多聚甲醛
- 戊二醛
- PBS (磷酸缓冲液 pH 7.2)
- 锇酸
- 乙醇
- 丙酮
- Spur
- 前固定液 (见溶液配方)
- 1% (w/v) 锇酸 (蒸馏水配制)
仪器设备
- 4 °C 冰箱
- 70 °C 恒温箱
- LKB-8800型切片机
- 镍网
- 透射电镜
实验步骤
注:除特别说明外,所有操作步骤均可在室温下进行。
- 前固定:将苹果果肉组织切分成2-3 mm3的小块,放入到前固定液 (见溶液配方) 中,抽气并在4 °C下固定组织块4 h。
- 冲洗:用4 °C保存的0.1 M PBS 洗三次,每次30 min。
- 后固定:1%锇酸4 °C下固定1.5-2 h。
- 冲洗:用0.1 M PBS (pH 7.2) 4 °C洗三次,每次30 min。
- 脱水
30%乙醇 (20min)→50%乙醇 (20min)→70%乙醇 (过夜)→80%乙醇 (20min)→90%乙醇 (60min)→100%乙醇 (60min)→100%乙醇 (60min)→100%乙醇 (20min)→丙酮 (20min)→丙酮 (20min) →丙酮 (20 min) - 置换
丙酮:Spur2:11 h
丙酮:Spur1:11 h
丙酮:Spur1:21 h
纯Spur1 h - 浸透:纯Spur浸透24 h以上。
- 包埋:Spur包埋。
注:不含水分及气泡。 - 70 °C下聚合8 h以上。
- 切片:用LKB-8800型切片机制备超薄切片,切片捞在100目以0.3% Formvar膜覆盖的镍网上
- 用透射电镜进行细胞超微结构观察。
溶液配方
注:本实验方案中所需的溶液除特殊说明外,均用蒸馏水配制。
- 前固定液
4% (v/v) 多聚甲醛
2.5% (v/v) 戊二醛
0.1 M PBS, pH 7.2 配制 - 1% (w/v) 锇酸
致谢
感谢国家自然科学基金 (30700646) 资助。本篇实验方案改编自先前发表的文章 Zhang et al. (2004)。
参考文献
- Zhang, L. Y., Peng, Y. B., Pelleschi-Travier, S., Fan, Y., Lu, Y. F., Lu, Y. M., Gao, X. P., Shen, Y. Y., Delrot, S. and Zhang, D. P. (2004). Evidence for apoplasmic phloem unloading in developing apple fruit. Plant Physiol 135(1): 574-586.
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:张凌云. (2018). 苹果果实细胞超薄切片的制备及超微结构透射电镜观察.
Bio-101: e1010241. DOI:
10.21769/BioProtoc.1010241.
How to cite: Zhang, L. Y. (2018). (2018). Preparation of Ultrathin Section of Apple Fruit and Observation of Cellular Ultrastructure by TEM.
Bio-101: e1010241. DOI:
10.21769/BioProtoc.1010241.