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siRNA文库转染条件优化方法
Optimization of siRNA Library Transfection
Authors:  田维新韩帅, 陈铭 and date: 10/22/2021, view: 3635, Q&A: 0
) siRNA文库可提前制备好并储存在孔板中冰箱保存，筛选实验开展前溶解后可直接使用，文库制备和筛选实验开展的时间安排相对灵活。 转染时间及siRNA浓度 我们利用Dharmacon公司的全基因组siRNA文库开展RNAi筛选时，siRNA的工作浓度一般选择20 nM，转染后48-96 h开展检测。 影响siRNA转染效果的因素，包括转染方式、细胞接种数目、转染试剂的种类及用量、转染时间及siRNA浓度等。 转染方式 siRNA
siRNA文库存储板的制备方法
Preparation of whole genome siRNA library
Authors:  杨荣超韩 帅, 陈 铭 and date: 08/20/2021, view: 2403, Q&A: 0
从多个siRNA筛选项目的结果来看，两种文库制备流程均可得到质量合格的siRNA筛选文库 (Mao et al., 2016；Li et al., 2017；Lu et al., 2019；Wang et 粉末态siRNA文库溶解、稀释及分装流程示意图 注:本文在文库制备过程中涉及到子板制备和工作板制备两步稀释的步骤，优点在于可尽量减少板内试剂反复冻融的次数。 材料与试剂siRNA文库 (Dharmacon)1.1G-1
高通量siRNA文库筛选体系的建立及优化
High-Throughput siRNA Library Screening Assay Development and Optimization
Author:  韩帅date: 10/22/2021, view: 3924, Q&A: 0
使用自动化液体工作站将siRNA文库从存储板分装至开展筛选所需的细胞培养板中，制备成可直接用于文库筛选的siRNA文库 (文库制 备的详细步骤及自动化液体工作站程序设置请参见本手册《siRNA文库存储板的制备 高通量siRNA文库筛选流程从具体操作步骤来讲，笔者单位开展正式高通量siRNA文库筛选的常规流程如图2。共有四个大的步骤：siRNA文库
siRNA文库筛选细胞活力调控因子---CellTiter-Glo法
siRNA Library Screening of Regulatory Factors of Cell Viability—CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay
Authors:  陈敏骆大葵, 韩帅, 李心翔, 高大明 and date: 06/01/2021, view: 3240, Q&A: 0
2.1由自动化液体工作站制备好siRNA文库板，每个孔10 μl siRNA（200nM）。 由于候选基因数量不多（<100个），且除了最后收集CTG数据外还希望获取整个实验过程中的细胞生长曲线，因此本实验选用96孔板进行siRNA文库筛选实验。 文库转染的方法进行敲减，一定时间以后通过检测CTG读值变化分析候选基因是否影响细胞生长。 1)NC和TOX siRNA的储存浓度为20 μM，用1 x siRNA Buffer按1:100稀释成200
调控RANKL降解的E3泛素连接酶的筛选
Screening of E3 Ubiquitin Ligase that Regulates RANKL Degradation
Authors:  王婧惠索金龙, 邹卫国 and date: 10/22/2021, view: 2189, Q&A: 0
... 我们使用其中与泛素化相关的亚文库： Ubiquitin Conjugation Subset 1：包含针对小鼠Cullin、E1、E2、HECT E3 Ligases等79个基因的siRNA亚文库。 Ubiquitin Conjugation Subset 2：包含针对小鼠F-box和SOCS box E3 Ligases等102个基因的siRNA亚文库。 筛选流程示意图材料与试剂384孔板 (PerkinElmer, ViewPlate-384 F TC, catalog number: 600
全基因组siRNA高通量筛选调控Wnt/β-catenin信号转导的关键基因
High-throughput Genome-wide siRNA Screen for Key Genes Regulating Wnt/β-CateninSignaling
Authors:  毛丽宋晓敏, 李林 and date: 12/07/2021, view: 3105, Q&A: 0
3)基因家族siRNA文库筛选 完成了基因家族siRNA组合文库的构建后，我们针对基因家族siRNA组合文库进行了高通量功能缺失筛选。 基因家族siRNA文库筛选结果 完成了基因家族siRNA组合文库的构建后，我们针对基因家族siRNA组合文库进行了高通量功能缺失筛选。 全基因组单基因siRNA文库筛选 在准备工作完成后，我们开始对小鼠全基因组
细胞周期调控因子筛选---FUCCI活细胞标记法
Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells Labeling Method
Authors:  鲁家骏韩帅, 杨巍维 and date: 09/05/2021, view: 4328, Q&A: 1
... 感谢中科院生化与细胞所化学生物学技术平台在高通量siRNA文库筛选及高内涵成像分析实验中给予的帮助，感谢细胞分析技术平台在流式细胞实验中给予的帮助。 二、 siRNA文库转染 经转染优化实验，确定最适转染条件为：在384孔板中，使用DharmaFECT1 0.05 μl/孔，细胞接种密度 650个/孔，转染72 h后进行表型检测 (见注意事项9)。 siRNA转染的具体操作步骤如下：阴阳性对照siRNA的制备：1.1使用1x siRNA buffer 分别稀释R