摘要:细胞周期 (cell cycle) 是指细胞从上一次分裂完成到下一次分裂结束所经历的全部过程,包括分裂间期和分裂期 (M期),其中分裂间期又可分为DNA合成前期 (G1期)、DNA合成期 (S期)、DNA合成后期 (G2期)。G0期是静止期细胞,它们暂时脱离细胞周期,停止细胞分裂,但在一定条件的刺激下,又可重新进入细胞周期进行分裂 (Cooper, 2000)。细胞是生命活动的基本单位,而细胞周期又与细胞的增殖和分化密切相关。因此,对于细胞周期的检测至关重要。细胞内的DNA含量会随细胞周期进程而发生周期性变化,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各阶段的百分比。常用于测定DNA含量的染料有碘化丙啶 (PI)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI)、7-氨基放线菌素 (7-AAD)、Hoechst 33342、Hoechst 33258等。本文主要就其中两种常用染料PI (固定细胞染色) 和Hoechst 33342 (活细胞染色) 的实验方法、注意事项和结果分析展开介绍。
关键词: 细胞周期, 流式细胞术, 碘化丙啶, Hoechst
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
注意事项
结果与分析
细胞周期的分析,以HeLa细胞为例,图1为固定细胞PI染色法,图2为活细胞Hoechst 33342染色法。首先用前向 (FSC) 和侧向 (SSC) 圈出细胞群,再用荧光通道的W (宽度)/A (面积)去除粘连细胞,最后用荧光通道的柱状图分析细胞周期。图中所标a、b和c分别代表G0/G1期细胞、S期细胞和G2/M期细胞。图1. 固定细胞PI染色法检测细胞周期图2. 活细胞Hoechst 33342染色法检测细胞周期
失败经验
染料浓度过高或过低或染色时间不够,都可能导致DNA的四倍体峰无法显示。
溶液配方
致谢
感谢中科院生物化学与细胞生物学研究所细胞分析技术平台的全体成员的建议和帮助。
参考文献
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