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高通量蛋白质稳定性鉴定和buffer条件筛选
High Throughput Protein Stability Identification and Buffer Screening
Authors:  王乐乐范仕龙 and date: 12/10/2021, view: 4725, Q&A: 0
16种不同pH条件的溶菌酶溶液制备： 从1中的溶菌酶母液中分别取16份50 μl母液到16个1.5 ml的EP管中，再将Stock Options pH筛选试剂盒中pH值为4.0, 4.2, 4.4, Stock Options pH筛选试剂盒： 商业购买，开封后放置于4 °C恒温间储存，用于筛选实验。 SLS266曲线3.3综上所述，通过高通量、全方面、多层次的分析检测之后，在选取的16种pH条件中，pH 4.0 – pH 4.6条件下的溶菌酶在溶液中的稳定性较好。 因此，得出pH 4
利用SPR技术高通量筛选蛋白互作活性小分子
High-Throughput Screening for Small Molecules Interacting with Targeted Protein by SPR Technology
Authors:  刘伟谢华彬, 王烁英, 慈云青, 许超, 兰姝珏, 陈铭 and date: 03/06/2025, view: 1847, Q&A: 0
以上各实验条件的确定即为Biacore 8K仪器在筛选时的合适工作条件。 pH Scouting实验中可使靶标蛋白产生最高偶联量的条件即为筛选所需条件。该步实验过程如图8所示。 ，例如10小时、18小时、26小时等条件处理后，检测各条件下靶标蛋白Tm值，以此确定筛选实验温度以及实验总时长；同样，根据靶标蛋白热稳定性变化即Tm值的变化来检测靶标蛋白对于不同浓度DMSO的耐受程度， 图1 利用SPR技术发现与靶标蛋白互作小分子化合物的高通
利用Biacore8K+高通量筛选靶向生物大分子的小分子活性物质
High-Throughput Screening of Small-molecular Targeting Biomolecular by Biacore8K+
Authors:  常卿杨姊, 李文奇 and date: 08/20/2021, view: 5340, Q&A: 0
它的设置是为了让系统按照方法设定的条件，以空白buffer进样进行至少三次模拟实验，使整个系统流路进入一个稳定的状态后在进行真正的进样实验。 所以需要在PH4-5.5之间以0.5PH步长进行条件摸索，根据预富集的结果选择最优的偶联条件。Startup cycles是不可或缺的，一般起始最少设置3个Startup cycles。 对NSP5蛋白进行抗COVID-19中药单体库高通量筛选的部分结果拟合示意图对于本次筛选实验通过分析软件中的On-off rate chart分析可以将蛋白与每个
新型冠状病毒广谱中和抗体药物的筛选
Screening of Broad-spectrum Neutralizing Antibody Drugs for Novel Coronavirus
Authors:  侯敬丽唐浩能 and date: 04/08/2024, view: 1068, Q&A: 0
抗体药物高通量筛选是指应用适当的筛选技术和方法对可能作为药物使用的抗体进行药理活性检测。近年来新发展的药物筛选技术包括磁共振、表面等离子体共振、质谱、差示扫描荧光、微流控芯片等技术[2]。 再生条件摸索： 用CM5芯片做抗原抗体互作测试时，需要选择合适的再生条件，既能满足将分析物洗脱干净的要求，又要保证配体蛋白的活性基本不受影响。 鉴于冠状病毒爆发的紧迫性，科学家们提出以高通量的方式筛选针对冠状病毒的潜在广谱药物，特别是针对SARS-CoV-2 ，从而快速准确地筛选出针
细胞周期调控因子筛选---FUCCI活细胞标记法
Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells Labeling Method
Authors:  鲁家骏韩帅, 杨巍维 and date: 09/05/2021, view: 4328, Q&A: 1
单克隆细胞株的筛选标准详情请见Sakaue-Sawano et al. (2008)。转染过程需要优化的条件有转染试剂的种类，转染试剂的用量，孔内细胞数量，确定最终检测的时间点等。 1× siRNA buffer5× siRNA buffer与RNase-free Water (Qiagen, 129117) 体积比1:4混合。 Operetta拍摄结果示例图图像分析：根据Hoechst信号的强度和面积设定条件遴选出视野中所有符合标准的细胞核。 根据前期实验条件摸索过程中确定细胞周期各个
利用Biacore 8K从哺乳动物细胞上清中快速筛选高亲和力抗体
Rapid Screening of High-affinity Antibodies from Mammalian Cell Supernatants Using Biacore 8K
Authors:  李昕贺娟华, 樊峥 and date: 10/19/2023, view: 1645, Q&A: 0
细胞上清中抗体浓度测定及捕获条件的摸索 因不同的重组抗体在细胞中的表达量有所不同，为避免不同抗体的捕获量差异太大对亲和力测定的影响，因此正式筛选实验前我们利用Biacore 8K软件中的浓度分析模块，用 四、样品制备以及亲和力检测 细胞上清用0.22 μm微孔滤器过滤，根据抗体浓度和捕获条件摸索结果进行稀释。 SDA-PAGE电泳检测蛋白大小及纯度：将上述收集的每管蛋白分别取20 μL于两个新的1.5 mL EP管中，加入5 μL 5× loading buffer及 5× loading buffer（
siRNA文库筛选细胞活力调控因子---CellTiter-Glo法
siRNA Library Screening of Regulatory Factors of Cell Viability—CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay
Authors:  陈敏骆大葵, 韩帅, 李心翔, 高大明 and date: 06/01/2021, view: 3240, Q&A: 0
筛选体系建立及优化 为建立最优的筛选实验体系，我们测试并优化了多种实验条件，主要包括：细胞接种密度、CTG检测阈值、CTG用量、siRNA转染试剂及用量。 筛选出候选基因后，后续再用其他实验辅助验证。 1)NC和TOX siRNA的储存浓度为20 μM，用1 x siRNA Buffer按1:100稀释成200 nM，每个孔加10 μl稀释后的siRNA。 每个条件各三个复孔即三块平行板，每块板的具体转染分布设计如下图：图2. siRNA转染试剂条件优化预实验设计 3)
siRNA文库转染条件优化方法
Optimization of siRNA Library Transfection
Authors:  田维新韩帅, 陈铭 and date: 10/22/2021, view: 3635, Q&A: 0
若筛选体系有已知的阳性基因，可根据阳性基因siRNA出现表型的时长确定筛选体系的时长。 反式转染是高通量siRNA筛选的主要转染方式，下文重点介绍反式转染的条件优化方法。 number: D-001810-10-05)TOX transfection control (Dharmacon, catalog number: D-001500-01-05)5x siRNA buffer ON-Target PlusTM Non-targeting control pool, NC) 及阳性对照TOX tran
生物钟调控基因的高通量siRNA筛选
A high-throughput siRNA Screen for Circadian Clock Modulators
Authors:  李慧林欧家丽, 唐芸棋 and date: 06/01/2021, view: 2021, Q&A: 0
细胞贴壁不牢，无法进行倒扣离心 可以不倒扣离心，直接在培液中加入ONE-Glo的方式检测生物发光值，但要对检测试剂用量，混匀时间等条件进行优化。 SD值为标准差；C.V值为离散系数，用于评估组内数据的离散程度；Z-factor也被称作Z-因子，用于评估筛选体系是否适合高通量筛选，Z-factor值介于0.5-1.0之间时，证明筛选体系适合进行高通量筛选 细胞数量过少或太多 在正式筛选开始前，应根据实验目的和筛选策略，选择大致的细胞密度范围进行预实验，以确定筛选